Укладка иммунохроматографических индикаторных элементов «УИХЭ-1»

Наши контакты

Укладка иммунохроматографических индикаторных элементов «УИХЭ-1»

Укладка иммунохроматографических индикаторных элементов «УИХЭ-1» (ТУ 4354-123- 05031637-2006) предназначена для отбора и анализа образцов, взятых из объектов внешней среды (смывы с твердых поверхностей, анализ образцов жидкости, анализ содержимого пробоотборников аэрозоля, анализ продуктов питания), предположительно содержащих клетки возбудителей особо опасных инфекционных заболеваний, а также токсины. Укладка защищена патентом РФ – № RU 77687.

Укладка иммунохроматографических индикаторных элементов «УИХЭ-1»

Иммунохроматографический анализ (ИХА) основан на принципе тонкослойной хроматографии и включает реакцию в биологических материалах между антигеном и соответствующем ему антителом. Проводится анализ с помощью специальных тест-полосок, панелей или тест-кассет (рис. 10.18).

Укладка иммунохроматографических индикаторных элементов «УИХЭ-1»

Метод основан на сепарации микрочастиц методом парной связки и реакции между антигеном и соответствующим ему антителом в биологических материалах (моче, цельной крови, сыворотке или плазме крови, слюне, кале и т.д.). Данный вид анализа осуществляется при помощи индикаторных полосок, палочек, панелей или тест-кассет, которые обеспечивают быстроту проведения тестирования. ИХА — сравнительно новый метод анализа, который часто обозначается в литературе также как метод сухой иммунохимии, стрип-тест, QuikStrip cassette, QuikStrip dipstick, экспресс-тест или экспресс-анализ. Эти названия связаны с быстротой проведения этого метода анализа.

Принцип действия иммунохроматографического теста состоит в том, что при его погружении в физиологическую жидкость она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Подвижной фазой в данном случае является физиологическая жидкость. Вместе с жидкостью движутся и антитела с красителем. Если в этой жидкости присутствует исследуемый антиген (гормон, инфекционный или онкологический маркер, токсин), то происходит его связывание как с первым, так и со вторым типом антител. При этом происходит накопление антител с красителем вокруг антител, жестко иммобилизованных в тест-зоне ИХА-полоски, что проявляется в виде яркой окрашенной полосы. Свободные антитела с красителем мигрируют далее вдоль полоски и неизбежно взаимодействуют с вторичными антителами в контрольной зоне, где и наблюдается вторая окрашенная (контрольная) полоса.

Взаимодействие (и окрашенная полоса) в контрольной зоне должно проявляться всегда (если анализ проведен правильно), независимо от присутствия исследуемого антигена в исследуемом субстрате. Результаты определяются визуально через 3—8 мин.

Метод иммунной хроматографии основан на особенном свойстве антител связываться с антигеном специфическим (т.е. избирательным) образом. Это означает, что каждое антитело узнает и связывается только со специфическим антигеном. На этой уникальной особенности антител и основаны все иммунологические методы анализа, в том числе и ИХА. Причем устанавливаемым «антигеном» в данном методе анализа может служить и определяемое в биоматериале антитело к инфекционному агенту или аутоантитела, тогда остальные используемые в тесте антитела будут являться антиантителами.

В ИХА-тестах используется три типа антител:

1) подвижные моноклональные антитела к исследуемому антигену или антителу, конъюгированные («сшитые») с коллоидным золотом — красителем, который можно легко идентифицировать даже в самых малых концентрациях. Эти антитела нанесены вблизи участка погружения тест-полоски в физиологическую жидкость (мочу, кровь);

2) поликлональные антитела к исследуемому антигену или антителу, жестко иммобилизованные в тест-зоне полоски;

3) вторичные антитела к моноклональным антителам, жестко иммобилизованные в контрольной зоне тест-полоски.

Существует два формата ИХА: прямой и конкурентный.

  1. В формате прямого (сэндвичного) ИХА используют конъюгат антитела-метка, нанесенный на мембрану для конъюгата. На тестовой полоске иммобилизованы антитела, специфические к конкретному анал иту, а на контрольной линии — антивидовые антитела, специфические к первичным антителам. При внесении образца, содержащего искомое вещество (конъюгат), на мембрану с конъюгатом происходит связывание искомого вещества с конъюгатом Ат-метка. Затем образовавшийся иммунный комплекс попадает в тестовую зону, где он связывается со специфическими антителами, образуя «сэндвич» Ат- Аг-Ат-метка. Далее избыток несвязавшегося конъюгата связывается с антивидовыми антителами на контрольной линии. Выявление двух линий на тест-полоске является положительным результатом теста. При отсутствии аналита в образце конъюгат связывается с антивидовыми антителами только на контрольной линии, образуя одну линию на тест-полоске.

Прямой ИХА используется для выявления возбудителей инфекционных заболеваний, высокомолекулярных соединений — вирусов, в том числе ВИЧ, различных гормонов (например, в тестах на беременность).

  1. Формат конкурентого ИХА используется для определения низкомолекулярных соединений. Он основан на конкуренции аналита и иммобилизованного конъюгата аналит: белок-носитель за ограниченное количество центров связывания специфических антител, содержащихся в конъюгате Ат-метка. При нанесении образца, в котором содержится аналит, последний связывается с конъюгатом Ат-метка на мембране с конъюгатом. В дальнейшем иммунокомплекс проходит через тестовую зону, где иммобилизован конъюгат аналит: белок- носитель. Иммунокомплекс не может связаться с этим конъюгатом из-за стерических затруднений: низкомолекулярные соединения обычно имеют одну антигенную детерминанту и, соответственно, иммуноглобулины имеют один центр связывания с антигеном, который уже является занятым аналитом. Впоследствии иммунный комплекс связывают антивидовые иммуноглобулины, находящиеся на контрольной линии. Отсутствие окрашенной полосы в тестовой зоне и наличие окраски в контрольной зоне свидетельствуют о том, что концентрация определяемого вещества в исследуемом образце превышает его пороговое значение для данного теста. При отсутствии в аналите анализируемого вещества в образце конъюгат Ат-метка связывается с конъюгатом Аг: белок-носитель, иммобилизованным в зоне тестовой линии. Свободный конъюгат Ат-метка попадает в зону контрольной линии и связывается там с антивидовыми антителами. Наличие двух окрашенных линий (тестовой и контрольной) является отрицательным результатом анализа.

Вариант конкурентного ИХА используют для выявления низкомолекулярных соединений, в том числе в экстрактах тканей.

Преимуществом метода — быстрота и легкость применения, возможность использования неприборных форматов ИХА с визуальной оценкой результата. Не требуется использования никакого оборудования, а анализ может быть проведен неспециалистом в любых условиях, в том числе «полевых».

Метки, используемые в ИХА. В качестве меток в ИХА используются различные вещества и частицы.

  1. Красители (наночастицы коллоидного золота или углерода, или частицы окрашенного латекса). Этот вариант обеспечивает визуальную детекцию результата либо приборное колориметрическое определение (или сканирование). Использование красящих меток, присоединенных к носителю (частицам латекса), позволяет проводить мультианализ, в котором линии разного цвета соответствуют различным аналитам. Чаще всего используемой меткой является наночастицы коллоидного золота.
  2. Ковалентно связанные с частицами латекса флуоресцентные, фосфоресцентные и биолюминесцентные метки. Они используются только в приборных вариантах ИХА, где результат регистрируется специальным ридером. Из всех вариантов наиболее распространены флуоресцентные метки.
  3. Закрепленные на частицах латекса парамагнитные метки. Метод используется в ИХА с применением приборов, регистрирующих силу магнитного поля.
  4. Ферментные метки, которые используются по принципу И ФА. Реакция регистрируется с помощью окрашивания субстратов. Результат анализа является визуальным или считывается с помощью ридера.
  5. Липосомы, которые используются в качестве носителей различного рода меток (красящих, флуоресцентных, ферментативных, элек- троактивных и пр.). Это новое направление в разработке различных разновидностей ИХА

Технические характеристики

Чувствительность, не хуже:

 

      по спорам бацилл

1х106 м.к./мл

      по вегетативным формам бактерий

1х106 м.к./мл

      по токсинам

30-300 нг/мл

Время анализа

25 мин

Рабочий диапазон температур

+10 …+ 40 °С

Срок годности ИИХЭ

1 год

Условия хранения

+5 … +25 °С

Масса

5,5 кг

Габаритные размеры

400×450×190 мм

Регистрация анализа

визуальная, либо с помощью видеоцифрового анализатора «Рефлеком» (Россия)

Наличие средств пробоотбора и утилизации отходов анализа

Да

Комплектность

Наименование индикаторного

элемента для выявления

Количество индикаторных элементов в базовой комплектации укладки, шт

По заказу

Возбудителя чумы ТУ 4354-124-05031637-2006

10

 

Возбудителя сибирской язвы (споры)

ТУ 4354-128-05031637-2006

10

 

Возбудителя туляремии ТУ 4354-125-05031637-2006

10

 

Возбудителя сапа ТУ 4354-126-05031637-2006

10

 

Легионелл первой серогруппы

ТУ 4354-143-05031637-2007

 

Да

Сальмонелл серогруппы В

ТУ 4354-151-05031637-2007

 

Да

Ботулинического токсина типа А

ТУ 4354-129-05031637-2006

10

 

Холерного экзотоксина ТУ 4354-144-05031637-2007

 

Да

Стафилококкового энтеротоксина типа В

ТУ 4354-149-05031637-2007

 

Да

Для выработки навыков работы оператора

ТУ 4354-130-05031637-2006

6

 

Рицина ТУ 4354-140-05031637-2006

 

Да

Для выявления примесей, вызывающих ложноположительные результаты иммунохроматографического анализа

ТУ 4354-138-05031637-2006

10

 

Буфер для проведения анализа

ТУ 4354-145-031637-2006

10х1,8 мл

Да (5,0мл)

Примечание: Возможна поставка отдельных индикаторных иммунохроматографических элементов и буфера анализа для пополнения расходных материалов.

Область применения

Лаборатории центров гигиены и эпидемиологии, биологический контроль и разведка при ликвидации чрезвычайных ситуаций, связанных с авариями на биотехнологических производствах, в научно-исследовательских учреждениях, упреждение террористических актов с применением биопатогенов в местах массового скопления людей, транспорте и предприятиях связи.

Коммерческое предложение

Наименование

Стоимость, тенге

Укладка иммунохроматографических индикаторных элементов «УИХЭ-1» (стандартная комплектация)

4 500 000

 Условия поставки

Стоимость указана со склада в г. Астана.

Стоимость доставки в другом городе Республики Казахстан определяется, исходя из условий договора.

Срок поставки – 45 дней.

Оплата производится в тенге.